AVALIAÇÃO DE PROTOCOLO DE EXTRAÇÃO DE DNA DE BRUCELLA SPP. EM SÊMEN BOVINO / EVALUATION PROTOCOL FOR DNA EXTRACTION OF Brucella spp. IN BOVINE SEMEN

Resumo

A brucelose é uma doença infecto-contagiosa, de caráter zoonótico e de grande importância tanto em produção animal, quanto na saúde pública. É causada por bactérias do gênero Brucella, que provocam orquites e epididimites uni ou bilaterais em touros, podendo levar a sub-fertilidade e a esterilidade. Machos bovinos assintomáticos tornam-se importantes disseminadores desta doença nos rebanhos. Desta forma objetivou-se avaliar o protocolo de extração de DNA de Brucella spp em sêmen in natura bovino, submetendo-os aos testes diagnósticos PCR (protocolo Lise Enzimática por Proteinase e Fenol: Clorofórmio – PK), Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) e Sêmem Plasma Aglutinação (SPA), de 33 touros utilizados em monta natural. O protocolo PK foi eficaz na extração de DNA de Brucella spp. Dos 33 touros testados, oito foram reagentes na PCR (24,24%), seis (18,18%) reagentes na SPA, e dos 23 animais com amostra de soro sanguíneo, um (4%) foi reagente para o AAT. Apenas um animal foi reagente na SPA e no AAT, e não reagente na PCR. Por outro lado sete animais apresentaram-se com sêmem reagente na PCR, e negativos nos testes de SPA e AAT. Portanto os resultados indicam a necessidade de associação de testes laboratoriais diretos, como a PCR, com os testes indiretos AAT e SPA, para um diagnóstico mais adequado de brucelose, quando forem utilizadas amostras de sêmen bovino.

SUMMARY

Brucellosis is an infectious disease of zoonotic character and great importance in animal production, as well as a public health matter. It is caused by bacteria of the genus Brucella, which cause unilateral or bilateral epididymitis and orchitis in bulls and can lead to sub-fertility and sterility. Asymptomatic bulls become important disseminators of the disease in herds. Therefore, this study evaluates the extraction protocol of DNA of Brucella spp. from bovine semen in natura. The semen samples of 33 bulls used for natural mating underwent PCR diagnostic tests (Lise Enzyme protocol by Proteinase and Phenol:Chloroform-PK), Buffered Acidified Antigen (AAT) and Semen plasma agglutination (SPA). The PK protocol was effective in the extraction of Brucella spp. Of the 33 bulls tested, eight were positive to PCR (24.24%), six (18.18%) to the SPA reagent, and from the 23 animals with blood serum sample, one (4%) was positive for AAT. Only one animal was positive in SPA and AAT, and not reactive in PCR. On the other hand, seven animals had semen reactive in PCR, and negative tests for SPA and AAT. Therefore, the results indicate the need for association of direct laboratory tests, such as PCR, with indirect tests AAT and SPA, for a more accurate diagnosis of brucellosis, when using samples of bovine semen.