DETECÇÃO DE INFECÇÕES POR Cryptosporidium spp. EM FILHOTES CANINOS POR MÉTODOS MOLECULARES / DETECTION OF Cryptosporidium spp. INFECTIONS IN PUPPIES BY MOLECULAR METHODS - PANEGOSSI, M. F. C.; WATANABE, A. E. G.; INÁCIO, S. V.; NETO, L. S.; MEIRELES, M. V.; BRESCIANI, K. D. S. (Ars Veterinaria, 2013)
O protozoário Cryptosporidium spp. é considerado um importante patógeno em termos de saúde pública (CIELOSZYK et al., 2012), sendo principalmente associado a baixo poder socioeconômico e precárias condições de saneamento básico (ASSIS et al., 2013). Cães eliminam oocistos fecais, com ou sem diarreia, sendo considerados potenciais fontes de infecção humana (WANG et al., 2012), apesar de isto não ter sido confirmado experimentalmente (BOWMAN & LUCIO-FORSTER, 2010; UEHLINGER et al., 2013). Detectar infecções por Cryptosporidium spp. em amostras fecais de filhotes caninos por meio da reação em Cadeia da Polimerase-Nested (Nested-PCR), foi o objetivo deste estudo. As amostras, previamente identificadas e congeladas, foram destinadas à inquérito molecular. A extração de DNA foi realizada por meio do kit comercial QIAamp DNA Stool (Qiagen) e a técnica de nested-PCR foi empregada para a amplificação de fragmentos do gene da subunidade 18S do RNA ribossômico. Um total de 200 cães foram examinados, sendo 100 machos e 100 fêmeas, 111 de padrão racial determinado e 89 sem raça definida (SRD). Destes, 81 animais, 43, 48 e 28 tinham até dois, de dois a três; de três a seis e de seis a doze meses, respectivamente. Conforme sua origem, os animais eram provenientes dos Municípios de Araçatuba e Votuporanga, SP, sendo que 126 eram de domicílios; 11 mantidos em centros de Zoonoses; 50 de Pet Shops; 12 de um criatório e uma (0,5%) era errante e havia sido adotada. A prevalência amostral de Cryptosporidium sp. em fezes de cães foi de 1% (2/200). Os dois animais eram fêmeas e SRD, com idade de 60 a 90 dias; uma é de origem residencial e a outra foi resgatada do Centro de Controle de Zoonoses. Embora a ocorrência tenha sido baixa, infecções por Cryptosporidium spp. foram detectadas por métodos moleculares em caninos deste estudo. SUMMARY The protozoan Cryptosporidium spp. is considered an important pathogen in terms of public health (CIELOSZYK et al., 2012), and is mainly associated with low socioeconomic status and poor sanitation conditions (ASSIS et al., 2013). Dogs eliminate fecal oocysts, with or without diarrhea, and are considered as potential sources of human infection (WANG et al., 2012), although this has not been confirmed experimentally (BOWMAN & LUCIO-FORSTER, 2010; UEHLINGER et al., 2013). This study aims at detecting infection by Cryptosporidium spp. in fecal samples from puppies by nested-polymerase chain reaction (Nested-PCR). The samples, previously identified and frozen, were intended for molecular investigation. DNA extraction was performed using the QIAamp DNA Stool kit (Qiagen) and the nested-PCR technique was used for the amplification of gene fragments of the 18S subunit of ribosomal RNA. A total of 200 dogs were examined, 100 males and 100 females, 111 of defined breed and 89 mongrel (non-defined breed, NDB). Of these, 81, 43, 48 and 28 puppies were up to two, two to three, three to six and six to twelve months old respectively. Regarding their origin, the animals were from the municipalities of Araçatuba and Votuporanga, SP, and 126 were household pets; 11 were kept in zoonosis centers; 50 were from Pet Shops; 12 from a breeding farm and one (0.5%) stray pet that had been adopted. The sample prevalence of Cryptosporidium sp. in dog feces was 1% (2/200). Of the two female mongrel animals, aged 60-90 days, one was a pet and the other was rescued from a zoonosis center. Although the occurrence was low, infection by Cryptosporidium spp. was detected in two puppies using molecular techniques.